产品目录

本试剂盒采用SABC-FITC荧光和SABC-POD酶促双显色原理，适用于一抗来源为大鼠的免疫荧光/组化实验。FITC在490～495nm激化，在520～530nm发射荧光，在荧光显微镜下呈明亮黄绿色。加入显色底物DAB显示后，染色呈棕黄色。用户根据实验需要，可在同一张切片上用两套显示系统观察。

SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的。链霉亲和素是一种从链霉菌中提取的蛋白质，分子量60000。同亲和素一样，对生物素分子有极高的亲和力，是一般抗原抗体亲和力的一百万倍。等电点接近中性，这些特点使链霉亲和素的非特异吸附很低。因该方法的中心是StreptAvidin-Biotin-enzymeComplex，故命名为SABC。SABC兼具高敏感性，低背景和操作简便的优点。

• 粘片剂APES或Poly-L-lysine。
  
• EDTA抗原修复液(10×)。
  
• 20mM PBS(pH7.2～7.6)：1L蒸馏水中加氯化钠9g，Na2HPO4·12H2O 7g，NaH2PO4·2H2O 0.5g。
  
• 10mM柠檬酸钠抗原修复液：1L蒸馏水中加枸橼酸三钠（C6H5Na3O7·2H2O）3g，枸橼酸(C6H8O7·H2O) 0.4g。
  
• DAB显色试剂盒。

• 石蜡片热修复染色步骤：
  
  • 石蜡切片，常规脱蜡至水。
    
  • 根据需要选择抗原修复方式及强度。可热修复、酶修复或不修复。
    
  • 热修复抗原：将切片浸入到EDTA修复液中，微波炉加热到沸腾后断电，间隔5～10min再修复1～2次，冷却。
    
  • 滴加稀释的正常兔血清封闭液(稀释比1:10)，室温20min，甩干，勿洗。
    
  • 滴加适当稀释的一抗，37℃孵育1～2小时或4℃过夜。PBS冲洗，5min×3次。
    
  • 滴加生物素化兔抗大鼠IgG，37℃孵育30min。PBS冲洗，5min×3次。
    
  • 滴加稀释的SABC-FITC或SABC-POD，37℃孵育30min。PBS冲洗，5min×3次。
    
  • 显色：镜下控制反应时间。显色剂可选DAB或AEC。自来水充分冲洗。
    
  • 苏木素复染，染色时间为0.5～2min。脱水，透明。
    
  • 选用中性树胶，水溶性封片剂或其他适当的封片剂封片。
    
  • 结果观察。荧光显微镜下有黄绿色颗粒者为阳性染色。普通光学显微镜下有棕黄色颗粒者为阳性染色。
• 石蜡片酶消化染色步骤：
  将A程序的第4步：滴加酶消化液室温5～10min。酶修复可选用复合修复液、胰蛋白酶、胃蛋白酶消化组织。蒸馏水洗2min×3次。
  
• 石蜡切片酶不消化/修复程序：对于不需要微波修复或消化的抗原，省略A程序中的第4步即可。
  
• 细胞片的染色步骤：
  
  • 爬片。圆形盖破片经防脱片剂处理（Poly-L-Lysine），灭菌，备用。贴壁细胞消化后加入放有盖玻片的24孔板中培养1～2天，使细胞贴壁。悬浮细胞则处理后直接涂片，使细胞贴附。
    
  • 固定。4℃预冷4%多聚甲醛固定20min或冷丙酮固定10min。蒸馏水洗2min×3次。
    
  • 打孔。0.25% Triton X-100处理细胞15min。（若采用丙酮固定则此步骤可省略）
    
  • 酶消化处理室温5～10min。酶消化可选用复合修复液、胰蛋白酶、胃蛋白酶。蒸馏水洗2min×3次。
    
  • 滴加稀释的正常兔血清封闭液(稀释比1:10)，室温20min，甩干，勿洗。
    
  • 滴加适当稀释的一抗，37℃孵育1～2小时或4℃过夜。PBS冲洗，5min×3次。
    
  • 滴加生物素化兔抗大鼠IgG，37℃孵育30min。PBS冲洗，5min×3次。
    
  • 滴加稀释的SABC-FITC或SABC-POD，37℃孵育30min。PBS冲洗，5min×3次。
    
  • 显色：镜下控制反应时间。显色剂可选DAB或AEC。自来水充分冲洗。
    
  • 苏木素复染，染色时间为0.5～2min。脱水，透明。
    
  • 选用中性树胶，水溶性封片剂或其他适当的封片剂封片。
    
  • 结果观察。荧光显微镜下有黄绿色颗粒者为阳性染色。普通光学显微镜下有棕黄色颗粒者为阳性染色。